熱門關(guān)鍵詞:臭氧消毒機(jī)、深部輸精管、豬精顯微鏡、連續(xù)注射器、BD采血針、豬精密度儀、動(dòng)物精zi分析儀、獸用B超儀、美運(yùn)高背膘儀、全能健豬精ye稀釋粉、采精手套、假母臺(tái)、17度精ye冰箱、安樂福耳牌筆、安樂福連續(xù)注射器、安樂福耳牌鉗、彌霧機(jī)、納米懸浮消毒機(jī)、超聲波通道消毒機(jī)
非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。臨床上以豬高熱、食欲廢絕、皮膚發(fā)紺、內(nèi)臟實(shí)質(zhì)、器官出血、呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主要特征。被動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病,在我倍列為一類動(dòng)物疫病。該病病程短,死亡率*,已對(duì)發(fā)病家的養(yǎng)豬業(yè)造成災(zāi)難性打擊。
2018年7月,遼寧省沈陽(yáng)市發(fā)生*非洲豬瘟疫情,截止2019年上半年,全共發(fā)生非洲豬瘟疫情100余起,包括25個(gè)省份(安徽、貴州、河南、黑龍江、湖北、湖南、吉林、江蘇、遼寧、內(nèi)蒙古、山西、陜西、天津、云南、浙江、重慶、江西、福建、四川、上海、北京、青海、廣東、甘肅、寧夏),非洲豬瘟對(duì)我養(yǎng)豬業(yè)的危害日益嚴(yán)峻。
ASFV是非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬的WEI一成員,病毒基因組全長(zhǎng)170~ 190 kb ,為有囊膜的雙股線狀DNA病毒,病毒粒子大小為175~215 nm,呈正二十面體結(jié)構(gòu)。該病毒可使各種日齡和品種的家豬與野豬感染并發(fā)病,病毒可在多數(shù)蜱種中增殖,使蜱成為病毒的貯藏宿主和主要傳播媒介。該病毒早于1921年在非洲東部肯尼亞被發(fā)現(xiàn),隨后開始在撒哈拉以南的非洲東部、中部、南部等地區(qū)蔓延。1957 年病毒從非洲的安哥拉傳到歐洲的西班牙,病毒開始在歐洲呈零星、持續(xù)流行。1971 年病毒從西班牙傳入南美洲的古巴,南美洲和拉丁美洲的多數(shù)家陸續(xù)暴發(fā)疫情。2007年病毒傳入歐亞接壤的高加索地區(qū),隨后開始向俄羅斯南部地區(qū)擴(kuò)散流行,2017年傳播至俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)伊爾庫(kù)茨克,導(dǎo)致傳入我的風(fēng)險(xiǎn)升高。2018年7月末,遼寧省沈陽(yáng)市一養(yǎng)豬戶飼養(yǎng)的豬陸續(xù)發(fā)生不明原因死亡,病死豬剖檢發(fā)現(xiàn)脾臟異常腫大,疑似非洲豬瘟病毒感染,經(jīng)家外來動(dòng)物疫病研究中心檢測(cè),確診為非洲豬瘟病毒核酸陽(yáng)性,通過序列分析發(fā)現(xiàn)引起該疫情的非洲豬瘟病毒B646L/p72基因序列與俄羅斯毒株100%匹配,與俄羅斯和東歐目前流行的格魯吉亞毒株( Georgia 2007 )屬于同-進(jìn)化分支,這是我發(fā)現(xiàn)的*非洲豬瘟,目前階段,面對(duì)非洲豬瘟還是以防疫銷毀為主。那么問題來了,當(dāng)豬類養(yǎng)殖戶或者豬肉產(chǎn)品加工企業(yè)應(yīng)該如何檢測(cè)非洲豬瘟?依據(jù)哪些家標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行檢測(cè)呢?
有關(guān)非洲豬瘟的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要有:
GB/T 18648-2002 《非洲豬瘟診斷技術(shù)》 、
SN/T 1559-2010 《非洲豬瘟檢疫技術(shù)規(guī)范》、
SZDB/Z131-2015《非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)阻斷酶聯(lián)免疫吸附法》 、
T/CVMA 5-2018 《非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測(cè)方法》 等。
這其中 GB/T 18648-2002 《非洲豬瘟診斷技術(shù)》制定時(shí),我還尚未發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟,所以只介紹了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試驗(yàn)(PCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)兩種試驗(yàn)方法。更多具體檢測(cè)試驗(yàn)方法可以依據(jù)SN/T 1559-2010 《非洲豬瘟檢疫技術(shù)規(guī)范》來進(jìn)行。其次,有關(guān)非洲豬瘟病毒鑒定檢測(cè)的試驗(yàn)主要病毒紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)(HAD)、病毒熒光抗體試驗(yàn)(FAT)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試驗(yàn)(PCR)、基因組Taqman探針熒光PCR試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT)、免疫印跡試驗(yàn)等。
下面對(duì)主要的幾種檢測(cè)方法做一個(gè)簡(jiǎn)單的介紹
1. 膠體金試紙檢測(cè)方法
膠體金試紙檢測(cè)方法是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物,利用層忻技術(shù)實(shí)現(xiàn)抗原抗體特異性檢測(cè)的一種新型的免疫檢測(cè)技術(shù)。該方法具有快速、靈敏、特異等優(yōu)點(diǎn),該方法操作簡(jiǎn)單,無(wú)需儀器設(shè)備,直接采血滴加到試紙條上20分鐘即可查看結(jié)果,尤其適合臨床的快速診斷,但該方法的敏感性較高,易出現(xiàn)假陽(yáng)性。
2.PCR法
PCR方法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速,是目前簡(jiǎn)單的分子生物學(xué)檢測(cè)技木,但該方法的敏感性有限,且擴(kuò)增后電泳檢測(cè)需要使用溴化乙錠,具有一定的毒性。PCR檢測(cè)方法具有很好的實(shí)用性,檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率較高,可以有效地應(yīng)用于ASF的診斷以及防控。
3. 熒光定量PCR方法
實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法是將光譜技術(shù)引入到PCR反應(yīng)中,通過熒光信號(hào)的強(qiáng)弱變化定量測(cè)定特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的量,解決了常規(guī)PCR方法敏感性低和電泳檢測(cè)中溴化乙錠對(duì)環(huán)境的污染問題。熒光定量PCR方法敏感性高、特異性強(qiáng),已逐步成為ASFV的臨床診斷、檢疫、食品安全檢驗(yàn)的重要方法。
4. ELISA方法
ELISA方法高通量、檢測(cè)快速、操作簡(jiǎn)單,是目前常用的免疫學(xué)診斷技術(shù),可用于豬群中ASFV感染的大規(guī)模調(diào)查。該方法具有敏感性高、重復(fù)性好、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高等特點(diǎn)。但作為血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)該方法具有一定的滯后性,無(wú)法對(duì)ASFV的早期感染做出診斷。
在我的《家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃( 2012-2020)》中,ASF被列為優(yōu)先防范的13種重大外來動(dòng)物疫病之一,且我已發(fā)生* ASF疫情,該病但在我廣泛流行,將給我養(yǎng)豬業(yè)及養(yǎng)豬相關(guān)產(chǎn)業(yè)造成巨大沖擊。目前應(yīng)加強(qiáng)流行病學(xué)調(diào)直和主動(dòng)監(jiān)測(cè)排查工作,保持高度警惕,防止該病在我的進(jìn)一步流行。
本文簡(jiǎn)單介紹了ASF各種診斷技術(shù)方法的優(yōu)缺點(diǎn),綜合比較來看,目前熒光定量PCR法是效果較好,污染較小的檢測(cè)方法,廣泛適用于養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、畜牧、疾控、食品企業(yè)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)等領(lǐng)域,是非洲豬瘟防控的優(yōu)選檢測(cè)方法。
熒光定量PCR非洲豬瘟檢測(cè) 配置方案
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格型號(hào) | 單位 | 數(shù)量 | 備注 |
1 | 便攜式實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 | 16孔 雙通道 | 臺(tái) | 1 | 核心部件全進(jìn)口 |
選配配件
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格型號(hào) | 單位 | 數(shù)量 | 備注 |
1 | 迷你離心機(jī) |
| 臺(tái) | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需儀器 |
2 | 移液器 | 10μL | 支 | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需儀器 |
3 | 移液器 | 200μL | 支 | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需儀器 |
4 | 旋渦震蕩儀 |
| 臺(tái) | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需儀器 |
5 | U盤 | 16G | 個(gè) | 1 | 數(shù)據(jù)儲(chǔ)存 |
6 | 非洲豬瘟熒光檢測(cè)PCR試劑盒 |
| 盒 | 1 |
|
7 | PCR八連管 |
| 條 | 30 | 實(shí)驗(yàn)所需耗材 |
8 | 10μL吸頭 | 96支/盒 | 盒 | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需耗材 |
9 | 200μL吸頭 | 96支/盒 | 盒 | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需耗材 |
10 | 1.5mL離心管 |
| 個(gè) | 200 | 實(shí)驗(yàn)所需耗材 |
11 | 乳膠手套 |
| 雙 | 30 | 個(gè)人防護(hù) |
12 | 1.5mL離心管架 | 60孔 | 個(gè) | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需耗材 |
13 | PCR管架 | 96孔 | 個(gè) | 1 | 實(shí)驗(yàn)所需耗材 |
14 | 醫(yī)用口罩 |
| 只 | 10 | 個(gè)人防護(hù) |
15 | 記號(hào)筆 | 黑色 | 支 | 1 | 樣本標(biāo)記編號(hào) |
16 | 計(jì)時(shí)器 |
| 個(gè) | 1 | 實(shí)驗(yàn)計(jì)時(shí) |
17 | 冰盒 | 藍(lán)色 | 個(gè) | 1 | 樣品保存用 |
18 | 實(shí)驗(yàn)用剪刀 |
| 把 | 1 | 實(shí)驗(yàn)用 |